Citrulline et réponse inflammatoire dans les cellules RAW 264.7
N.Tennoune-El Hafaia Nutrition Clinique et Métabolisme
Introduction et but de l’étude
Nos travaux in vivo et ex vivo mettent en évidence des effets anti-inflammatoires de la citrulline (Cit) dans différents modèles de stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD). Il a par ailleurs été montré que la Cit agissait sur les macrophages isolés de rats âgés en atténuant leur phénotype inflammatoire, et en particulier la production de NO. Les effets anti-inflammatoires de la Cit au cours de la NAFLD pourraient impliquer son action sur les macrophages du foie, les cellules de Kupffer. Nous avons donc évalué les effets de la Cit sur des cellules RAW 264.7, une lignée validée comme modèle de cellules de Kupffer.
Matériel et méthodes
Une lignée de macrophages murins (RAW 264.7) a été cultivée en présence ou en l’absence de Cit (2 mM) et soumise ou non à un stress inflammatoire (50 ng/mL de lipopolysaccharide [LPS]), pendant 3, 6 ou 24 h. L’expression de gènes de l’inflammation (Tlr4, Il6, Tnfα, iNos, Il10, Il4) a été évaluée par RT-qPCR. Nous avons mesuré la production de NO (méthode de Griess à la nitrate reductase) et celle de TNFα par ELISA. L’analyse statistique a été réalisée par Anova à deux voies suivi d’un test de Tukey. Seuil de significativité : p ≤ 0,05.
Résultats et analyse statistique
La Cit seule entraînait une augmentation d’expression d’Il10 à 6 h. Cet effet disparaissait en présence de LPS. Le LPS induisait une augmentation de l’expression d’Il6 et de Tnfα dès 3 h de traitement, avec un maximum à 24 h (p ≤ 0,05), et la Cit diminuait significativement cette expression (p ≤ 0,05). L’expression d’iNos et d’Il4 n’était augmentée par le LPS qu’après 24 h de traitement, et était significativement diminuée en présence de Cit (p ≤ 0,05). La production de NO et de TNFα étaient significativement augmentée en présence de LPS et atténuée en présence de Cit après 24 h de traitement (p ≤ 0,05).
Conclusion
La citrulline atténue la réponse au LPS des cellules RAW 264.7. Des études de co-culture permettront de comprendre les interactions entre les hépatocytes et les cellules de Kupffer et l’influence de la Cit sur celles-ci au cours de la NAFLD.
